Después de los experimentos de Griffin, quedaron muchas posibilidades abiertas. Siguieron una serie de repeticiones para demostrar que el fenómeno de las transformaciones de una tipo de neumococos en otro era real, los primeros fueron Neufeld y Levin en 1929. Pero quedaron muchas dudas, quién podía asegurar que los ratones no contuvieran el neumococo patógeno desde antes de el experimento o que el calentamiento de los neumococos patógenas no los destruyera a todos. Enseguida Banrherm en 1932, Dawson, M. H., y Sia, R. H. en 1931, le dieron un giro importante a la investigación. En lugar de utilizar ratones, recurrieron a cultivar las bacterias patógenas, en medios de cultivo líquidos. Lo primero fue tomar una muestra de neumococos rugosos (R) y cultivar el medio con suero que atacaba a estas bacterias y además agrego restos del neumococos peligrosos el Liso (L), el del algodón de azúcar, destruido por calor. Se demostró que la trasformación de las bacterias R en L es posible en tubos de ensaye sin necesidad de ratoncitos. Dentro de sus pruebas tomo las muestras de la neumococos peligroso (L), lo destruyó con calor y recurrieron a filtro muy finos para eliminar cualquier posibilidad de que una bacteria completa pasara al tubo de ensaye de la reacción. Con lo que se demostró que el elemento transformador podía ser suficiente pequeño y quedar en la sustancia extraído de la filtración.
Berry, G. P., y Dedrick, H. M., 1936, provaron la trasformación de una patógeno débil en uno peligroso con los virus. Siguió los mismos pasos de Griffin, pero en lugar de ratones usó conejos y virus. Transformó un virus de fibroma de conejo (inofensivo) en virus mixoma con síntomas fuertes y peligrosos. Al mesclar el virus Fibroma vivo, con el virus mixoma destruido por calor e inyectar la mezcla en forma subcutánea, se produce en los animales síntomas y las lesiones patológicas característicos de enfermedades infecciosas mixomatosis. Al tomar el virus del animal enfermo e inoculárselo a otro conejo este desarrollaba la enfermedad.
En noviembre de 1943 Oswaldt T. Avery, Colin M. MacLeod, y Maclyn McCarty, presentaron un estudio donde se repitieron los mismos experimentos, pero en esta ocasión buscaron aislar cada uno de los componentes fundamentales de la célula bacteriana.
(La imagen mestra del lado izquierdo las colonias de meumococos rugosos (más pequeños) y las del lado derecho son colonias lisas (más grandes)).
En el artículo original se toman en cuentan muchos detalles, desde el medio de cultivo, la forma de conseguir el suero, que en este caso fue tomado de conejos, y las características de las bacterias patógenas. Otro detalle que quedó claro es que para identificar una neumococos patógeno de uno menos peligroso sólo se recurrió a la forma de la colonia en medios de cultivo sólidos.
El método de purificación es interesante, porque se utilizan algunos sustancias químicas como el cloroforma para eliminar proteínas (método qué aun está presente en los laboratorios de genética de alta tecnología). Pero el uso de sueros, llámemelos anticuerpos, para eliminar azucares es, digamos “viejo” y no se aplica actualmente. También se usan enzimas, estas tenían mucha aplicaciones en el proceso de purificación.
Dejemos el método, y pasemos a los resultados. Aislaron las tres sustancias fundamentales: azúcares, proteínas y DNA, de neumococos patógeno, de colonias lizas. Enseguida tomaron bacterias neumococos menos nocivas y las cultivaron añadiendo un suero contra ellos. Después se agregaba la sutancia que se aislo de la bacteria patógina, digamos proteínas, se dejaba pasar un tiempo y despues se tomaba una muestra para cultivar en medio de gelatina. Asi se probaron cada una de las sustancias aisladas por separado del organismo patógeno y en el cultivo final de gelatina sólo con una sustancia probada se consigió la trasformación de un neumococo rugoso en una liso, patógeno . Encontraron que sólo el DNA producía un cambio de una bacteria neumococos tipo II (Rugosa), a una del tipo III (Lisa, patológica)
El importante articulo termina con una sola frase bajo el nombre de conclusiones: “La evidencia presentada apoya la creencia de que un ácido nucleico del tipo desoxirribosa es la unidad fundamental del principio de transformación de neucoccus Tipo III”. Conclución que entonces era tan verdadera como lo es ahora.
Pero todavía faltaban más pruebas..
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